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“初代培养”一般实验过程及操作注意事项

发布时间:2021-10-27

  初代培养:动物机体各种组织从机体中取出,经各种酶、EDTA或机械法处理,分散成单细胞,在培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 

 

 
 

 

 
 

 

 
 

 

 
 

 

  常用的初代培养有组织块培养和分散细胞培养。组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。如欲从胎儿或新生儿的组织分离到活性较好的游离细胞,经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物,或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+,再经机械轻度振荡,使之成为单细胞。 

 

 
 

 

  实验所需设备: 

 

 
 

 

 
 

 

 
 

 

  AlphaClean1300洁净工作台 

 

 
 

 

 
 

 

 
 

 

  HF180二氧化碳培养箱 

 

 
 

 

 
 

 

  AlphaClean1300洁净工作台、培养瓶、HF180二氧化碳培养箱、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、低速离心机、水浴箱(或恒温箱) 

 

  实验所需试剂:培养基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank′s液,碘酒 

 

  实验所需样本:动物组织块 

 

  初代消化培养法: 

 

  1、已消毒培养用品置于AlhaClean1300洁净台的净化台面,紫外线消毒20分钟; 

 

  2、开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部,开启红外灭菌器或酒精灯,安装吸管帽; 

 

  3、Hank′s液漂洗组织2-3次(把组织块置于烧杯中),去血污(如怀疑组织可能污染,先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟); 

 

  4、用眼科剪将组织切成块(2~3毫米大小),加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞; 

 

  5、用恒温水浴或置于37℃恒温箱消化,消化中每隔20分钟摇动一次,消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定; 

 

  6、消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过不锈钢筛滤掉尚未充分消化开的组织块,低速(500~1000 RPM/min)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液; 

 

  7、用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO₃调整; 

 

  8、放置于CO₂培养箱中培养箱,温度为:36.5℃,瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞,每次换液时需要换新塞。 

 

  无菌操作注意事项: 

 

  1、操作前要洗手,进入AlphaClean1300超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试,试剂等瓶口也要擦试; 

 

  2、点燃红外灭菌器或酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜; 

 

  3、操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会; 

 

  4、不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理; 

 

  5、瓶子开口后要尽量保持45℃斜位; 

 

  6、吸溶液的吸管等不能混用; 

 

  7、组织块、胰蛋白酶、培养液等易受紫外线伤害的物品,在培养时再携入操作野;如预先置入,需用纸张覆盖,以免受射线影响; 

 

 
 

 

  上海诺瓘电子科技有限公司总部位于上海市青浦区沪青平公路3938弄1号楼309室,是集产品研发、生产、销售、服务为一体,产量、质量两者兼备的高科技、高效实体企业。 

 

 
 

 

 
 

 

  公司专业生产恒温恒湿系列、二氧化碳细胞培养系列、人工气候系列、光照培养箱系列、低温生化培养箱系列,霉菌培养箱等实验室仪器设备,并不断开发系列高精尖的产品。 

 

 
 

 

 
 

 

  产品广泛用于医疗医学、科研院所、大专院校、食品卫生等单位机构。 

 

 
 

 

 
 

 

  近年来,公司凭借其非凡的品质和卓越的服务,得到了国内用户及业界的广泛赞誉。公司将致力于发展高品质的服务团队,提供市场管理、技术指导和设备安装、售后服务水平。诚邀全国各地代理商加盟,共同携手服务于中国实验室仪器设备市场。 

 

 
 

 

 
 

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